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文章解析 | 阻断CD47的增强型CAR-T细胞疗法,破解胶质母细胞瘤耐药难题!

SIRPγ CD47 glioblastoma
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通过旁分泌型SIRPγ衍生CD47阻断剂增强抗EGFRvIII CAR-T细胞治疗胶质母细胞瘤疗效

文章标题:

Enhancing anti-EGFRvIII CAR T cell therapy against glioblastoma with a paracrine SIRPγ-derived CD47 blocker

发表期刊:Nature Communications 

发表年份:2024年

关键词:

胶质母细胞瘤、CAR-T细胞疗法、EGFRvIII、CD47阻断、SIRPγ、生物发光成像、巨噬细胞吞噬、免疫逃逸、肿瘤异质性、NanoLuc®萤光素酶、Firefly萤光素酶、Fluorofurimazine(FFz)底物、D-萤光素底物

原文链接:

DOI:10.1038/s41467-024-54129-w


01

研究背景

胶质母细胞瘤(GBM)是一种侵袭性脑肿瘤,常对传统疗法产生抵抗,因此亟需创新治疗策略。GBM的一个关键特征是肿瘤特异性EGFRvIII突变,该突变在肿瘤演进过程中伴随EGFR基因拷贝数的增加而出现。这导致肿瘤内部异质性:部分细胞表达EGFRvIII突变,另一部分则不表达。这种异质性引发抗原逃逸,成为嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞治疗耐药的主要挑战之一。本研究开发了一种增强型CAR T细胞疗法,不仅能靶向表达EGFRvIII的细胞,还能应对这类异质性肿瘤的抗原逃逸问题。为此,研究人员对anti-EGFRvIII CAR T细胞进行了进一步改造,使其共表达并分泌信号调节蛋白γ(Signal Regulatory Protein Gamma,SGRP)—— 一种SIRPγ衍生的CD47阻断剂。肿瘤细胞表面的CD47通过结合巨噬细胞表面信号调节蛋白α(Signal Regulatory Protein Alpha,SIRPα)抑制吞噬作用,从而逃避免疫清除。通过阻断CD47,该策略可破坏肿瘤免疫逃逸机制,恢复肿瘤微环境中免疫细胞的吞噬功能,从而通过aEGFRvIII-SGRP CAR T细胞实现双重治疗作用——既靶向EGFRvIII阳性细胞,又解除CD47介导的免疫抑制。



02

研究方法

为评估aEGFRvIII-SGRP CAR T细胞的体内行为和治疗效果,研究者采用双萤光素酶报告基因生物发光成像技术对原位胶质母细胞瘤异种移植模型进行观察。鉴于GBM的异质性特征,研究使用NanoLuc®(Nluc)萤火虫萤光素酶(Fluc)两种不同萤光素酶报告系统,追踪不同治疗方案对独立的肿瘤细胞亚群的作用效果。Fluc在缺乏EGFRvIII突变的胶质母细胞瘤细胞中表达,通过D-萤光素作为底物实现对EGFRvIII阴性肿瘤负荷的实时监测;Nluc则用于标记EGFRvIII阳性肿瘤细胞,通过Fluorofurimazine(FFz)底物追踪这些阳性细胞对CAR T细胞治疗的反应。由于这两种萤光素酶报告系统具有不同的底物特异性,研究得以在体内GBM模型中独立监测EGFRvIII阳性和阴性肿瘤群体的动态变化,从而全面呈现随时间变化的肿瘤异质性及治疗效果。


<点击下方视频观看NanoLuc®萤光素酶在活体成像中的多重标记应用>



03

实验结果

研究结果表明,与常规CAR T细胞相比,aEGFRvIII-SGRP CAR T细胞展现出更优的抗肿瘤活性,包括清除大部分EGFRvIII阴性报告细胞群体。通过阻断CD47,这些工程化细胞在临床前GBM模型中实现了更好的肿瘤清除效果并延长生存期。这些发现提示,将CD47阻断策略整合至CAR T细胞治疗中可能有助于克服胶质母细胞瘤的免疫逃逸机制,为未来治疗应用提供了重要启示。


点击此处阅读原文


04

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规格

目录号

Nano-Glo® Luciferase Assay System

10ml

N1110

100ml

N1120

10×10ml

N1130

10×100ml

N1150

Nano-Glo® Fluorofurimazine In Vivo Substrate (FFz)

1 each

N4100

5 each

N4110

Sequencing Grade Modified Trypsin

5 × 20ug

V5111

1 × 100μg

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